Mesures analytiques de l’activité biologique

Une approche développée par notre équipe analytique consiste à rechercher des molécules actives à partir des plantes et à tester leur aptitude à inhiber des enzymes d’intérêt cosmétique (i.e. tyrosinase) et thérapeutique (i.e kinases). L’originalité de notre méthodologie, fait appel à la Chromatographie d’Affinité Frontale et l’approche « IF-MS » pour « Intensity Ion Fading Mass spectrometry », ces deux techniques utilisant l’immobilisation des enzymes d’intérêt sur billes magnétiques de silice. Cette méthodologie permet, à partir d’un extrait végétal, de déterminer, d’une part, les interactions spécifiques entre des molécules d’intérêt présentes dans un extrait végétal brut et l’enzyme cible et d’autre part, d’obtenir le classement des ligands/inhibiteurs en fonction de leurs affinités avec la cible biologique.

Ion-Fading Enzyme-coupled Nanoparticle-Assisted LDI (IF-ENALDI) principle
Ion-Fading Enzyme-coupled Nanoparticle-Assisted LDI (IF-ENALDI) principle

De plus, l’équipe possède une expérience approfondie sur les tests enzymatiques réalisés à l’échelle du nanolitre par électrophorèse capillaire (EC) dans les domaines cosmétique et thérapeutique. Le capillaire joue alors le rôle de nanoréacteur enzymatique dans lequel de faibles volumes de réactifs sont injectés sous forme de créneaux étroits et successifs, puis mélangés par application d’un champ électrique (mode EMMA) ou d’une forte pression (mode TDFLP) durant un court laps de temps. Les courbes dose-réponse ont été tracées in vitro pour des inhibiteurs de kinases intervenant dans diverses voies de signalisation et leurs valeurs d’IC50 ont été déterminées. Cette nouvelle méthodologie analytique présente également un vif intérêt pour évaluer l’activité biologique in cellulo. En outre, l’activité de la b-galactosidase (marqueur de sénescence cellulaire) a été déterminée selon l’approche EMMA dans des bactéries et des cellules de la peau en réalisant la lyse directement dans le capillaire par électroporation. Aussi, l’activité inhibitrice de flavonoïdes présents dans des extraits de plantes (argousier) vis-à-vis de kinases a pu être évaluée par EC.

Evaluation de l’inhibition enzymatique par électrophorèse capillaire
Evaluation de l’inhibition enzymatique par électrophorèse capillaire